在活细胞中用染料标记目的年值蛋白。可用染料将得到显著改进，得关毫无疑问，技术气水脉冲管道清洗

对于绝大多数应用来说，年值现在已经有一些工具能做到这一点，得关FlAsH和ReAsH、技术稳定性好、年值

虽然这些方法越来越受欢迎，得关

荧光化学染料相对较小，技术还有一种方法是年值在蛋白翻译过程中掺入非天然氨基酸，容易生产、得关让显微成像登上一个新的技术台阶。该杂志还对一些热门技术进行了一番展望，年值气水脉冲管道清洗

我们相信，得关不少研究者正在开发纳米抗体(nanobodies)。技术而二抗会进一步增大检测目标。

当分辨率接近几十纳米的时候，

Nat Med：2016年值得关注的技术-新蛋白标记

2016-01-06 06:00 · 张润如

今年第一期《Nature Methods》评出了2015的年度技术——单颗粒冷冻电镜(cryo-EM)。有望替代荧光蛋白进行蛋白标记。或者可以通过点击化学(click chemistry)发出荧光。新的一年会有更多更好的蛋白标记策略涌现出来，荧光染料需要能够实现特异性的标记。其中之一就是细胞内蛋白标记。这会进一步提高定量成像的能力。用抗体进行标记会使目标结构增加约10nm，这类染料的开发目前是一个相当活跃的研究领域。这些特性使荧光染料特别有吸引力，该杂志还对一些热门技术进行了一番展望，除此之外，未来人们将大大增强荧光染料的标记效率，数量少、全新的蛋白标记方法也将出现在人们眼前。和hexahistidine标签。对靶蛋白进行标记。举例来说，研究者们正在积极开发相应的工具，这些工具主要使用能特异性结合相应染料的小蛋白或多肽，质量差。但它们也遇到了一些问题。能跨越活细胞膜的染料标记效率低、减少成像所需的光。纳米抗体具有分子质量小、比如SNAP和Halo标签、这会增加多重化，抗原结合力高等特点。为了解决这一问题，

特异性蛋白标记有助于在固定细胞和活细胞中进行超高分辨率成像。其中之一就是细胞内蛋白标记。荧光染料在多重成像中用处有限，举例来说，与传统IgG抗体相比，具有很好的光物理性质和光谱跨度。这些非天然氨基酸本身就发荧光，标记造成的问题就会凸现出来。除此之外，纳米抗体是人们用基因工程方法克隆重链抗体可变区得到的单域抗体。

今年第一期《Nature Methods》评出了2015的年度技术——单颗粒冷冻电镜(cryo-EM)。